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        一種從熱帶木本植物中無毒組織研磨提取核酸的方法

          發布時間:2019/12/19 點擊量:1697

            木本熱帶植物中含有大量復雜的有機化合物,這些有機化合物會抑制提取RNA或DNA所需的化學程序,從而不利于后續研究及應用,如RNA測序和基因表達分析。為了克服這個問題,研究人員必須使用CTAB / PVP緩沖液的提取方案,而不能使用市售的DNA / RNA提取試劑盒。但是,這種提取方式耗時長、需使用有毒化學品(例如苯酚和CHCl3),并且一次只能處理少量樣品。為了克服這些問題,我們開發了一種基于CTAB / PVP的新方法,用于RNA或DNA提取,去掉了傳統方法中的苯酚/CHCl3步驟。此外,該方法同樣適用于96孔深孔板,使用SPEX高通量組織研磨儀,一次研磨6塊深孔板,同時處理576個樣品,大大加快了處理速度。

         

            我們的新方法,能夠從夏威夷果、牛油果和芒果組織中,成功提取RNA,這些組織使用傳統方法很難提取到RNA。而后我們還驗證了,該方法提取的RNA成功地合成cDNA,以進行實時定量PCR并生成高質量的RNA-Seq庫。該方法經輕微改動后,可用于從不同的熱帶和亞熱帶樹種中快速提取DNA。

         

            這種方法可以更安全、更快速地從困難樣品中提取DNA和RNA,從而為將來在熱帶樹木上的研究提供了便利。

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